直接ELISA
直接ELISA通常用于分析对抗原的免疫反应，例如细胞或组织的免疫组织化学染色。 此ELISA方法需要将抗原包被到多孔板上。 为了检测，使用直接与酶结合的抗体。 此方法的工作流程相对简单，仅需几个步骤。
直接ELISA法的优缺点
直接ELISA法的优点
- 简单快速-只需要一个抗体，工作流程只有几个步骤。
- 更少的错误倾向——与其他ELISA方法相比，移液步骤的数量相对较少，并且由于单一抗体，几乎没有抗体交叉反应的风险。
直接ELISA的缺点
- 灵敏度有限——没有信号放大步骤。
- 耗时的测定开发——每个测定靶都需要特异性的偶联一抗，这也使测定相对昂贵。
- 抗体反应受限的风险——酶与抗体的连接可能会限制抗体上应与抗原结合的位点的空间利用率。
间接ELISA
间接ELISA是最常用的ELISA方法，采用两步检测过程。首先，一种未标记的一抗特异性地与抗原结合。第二，酶偶联的二抗与一抗特异性结合。该方法常用来测定样品中的总抗体浓度。
间接ELISA法的优缺点
间接ELISA的优点
- 灵活性——如果二抗与一抗的宿主物种相匹配，并且可以从市场上购买到多种标记的二抗，则可以使用二抗。
- 敏感性——一种以上的标记抗体可以结合一级抗体，因为每种一级抗体都包含多个表位。
- 最大的免疫反应性——没有标记干扰第一抗体上的位点。
- 经济——需要的标记抗体更少。
间接ELISA的缺点
- 更复杂的工作流程——二抗需要额外的孵育步骤。
- 交叉反应的可能性——由于与第二抗体发生交叉反应而产生的非特异性信号。
夹心ELISA
夹心ELISA使用一种所谓的捕获抗体包被孔，该孔结合了样品中的抗原。 然后以直接或间接ELISA配置检测抗原。 此方法通常用于分析复杂样品。
夹心ELISA法的优缺点
夹心ELISA法的优点
- 灵活性和灵敏度——直接和间接的检测方法都可以使用。
- 高特异性——两种抗体用于检测抗原。
- 适用于复杂样品——在测量前不需要纯化抗原。
夹心ELISA的缺点
- 复杂的工作流程——与其他ELISA格式相比，需要更多的孵化步骤。
- 需要更多的优化——必须检查不同抗体之间的交叉反应性。
竞争ELISA
上述每种检测类型都可用于竞争ELISA，也称为抑制ELISA。该方法的基本概念是使样本抗原与抑制剂抗原竞争，并与数量有限的标记抗体结合。将抑制剂抗原预先涂在微孔板上。然后将预先与标记抗体孵育的样品加入孔中。样本中抗原越多，检测到的信号就越弱，因为能与抗原结合的抗体越少。这种方法通常用于分析只有一个抗原表位的小抗原。
竞争ELISA法的优缺点
竞争性ELISA的优势
- 最高的灵活性——可以基于直接，间接或夹心ELISA形式
- 最高特异性——特异性捕获和检测抗原
- 非常强大——最小化样品稀释和样品基质效应的影响
竞争性ELISA的缺点
- 相当耗时——非常复杂的方法
所选检测格式的缺点适用