该技术的检测极限为1 pg ATP,相当于大约1000个细菌细胞。
使用生物发光ATP检测进行卫生监测可提供:
- 速度(数分钟,比培养和菌落计数快得多)
- 方便
- 整体卫生的测量
ATP检测用于卫生监测的原理
为了卫生测试,确定样品的总ATP含量。这将包括真核和微生物ATP。必须谨慎,以免污染样品或材料,因为在许多表面上都会发现ATP。
用户用不含ATP的缓冲液,水或萃取剂预先润湿不含ATP的拭子。使用萃取剂可以有效地从表面释放ATP,从而有助于采样。通常使用便携式发光仪立即对拭子进行测试。但是,某些产品,拭子可以在几个小时内保持稳定,如果需要,用户带样品返回工作站检测。
为了确定微生物的ATP水平,使用选择性提取。首先,用非离子型去污剂(Triton X-100)提取非微生物ATP,然后通过用高水平的马铃薯ATPase处理5分钟将其破坏。随后,使用三氯乙酸(5%),有机溶剂(乙醇,丙酮或氯仿)萃取微生物ATP,随后需要稀释以去除对荧光素酶有抑制作用的有机溶剂或阳离子去污剂。在最后一步中,添加萤光素酶和萤光素,并使用发光仪测量发光强度。需要准确的混匀和读数时间以抑制萤光素酶(Simpson&Hammond,1991)。由于真核细胞中的ATP水平比细菌细胞中的ATP高三个数量级,因此有时很难准确地分别定量真核微生物ATP。
许多制造商将所有需要的试剂和材料作为现成的试剂盒提供,以使操作更简便,更快捷。
结果解释
通常,干净的表面显示出较低的总ATP含量。 因此,大于清洁表面背景2到3倍的光输出表明测试区域被生物材料污染。 该方法非常灵敏,实际上可以接受10倍于本底的阈值。 但是,无论使用哪种产品,都需要进行一些初步的工作来确定测试的相关通过/失败极限。 通常通过根据常规清洁程序收集参考数据来完成此操作。 水平的设置取决于表面的类型和状况以及所使用的清洁方法。
推荐用于卫生监测的仪器
便携式发光仪通常是卫生监测的首选仪器,因为测量通常在现场进行。 廉价的基于光电二极管的手持式发光仪有时足以进行定性分析(被污染/未被污染)。 诸如Junior LB 9509之类的基于PMT的仪器具有更高的灵敏度和动态范围。 这是定量测量的最佳选择