敏感的单位
大多数微孔板阅读器规范将其灵敏度表示为一种物质的数量,典型的是ATP或荧光素酶表示发光,荧光素表示荧光。对于其他检测技术,可以是使用该技术的试剂盒检测到的任何其他物质。他们还会使用Femtomole、Attomole和Zeptomole等术语。那么,这些术语是什么意思?
您们知道,阿伏伽德罗数是一摩尔物质中的分子数。其值为6.022 x 1023。因此,一摩尔物质由602,250,000,000,000,000,000,000个分子组成:
一个飞模是1 × 10-15或千万亿分之一摩尔(0.000000000000001)。这是~602,200,000个分子(阿伏伽德罗数X (1 X 10-15))。
一个原子是1 × 10-18,即1摩尔(0.000000000000000001)的十亿万亿分之一,大约有602,200个分子。
一个Zeptomole是1 × 10-21,即1摩尔的10的10次方之一(0.00000000000000001),大约602个分子。
正如您从上面看到的,这意味着我们处理的数字非常小,特别是在Zeptomole水平。那么,我们如何利用所有这些来评估任何仪器的性能呢?我们需要考虑两个关键标准:检测下限(灵敏度)和变异系数。
检测的下限是产生仪器响应超过空白噪声的最小采样量,称为灵敏度。
变异系数是一组读数随时间变化的百分比——这意味着仪器性能的一致性。
变异系数和下限只能用已知的标准来获得。
计算检测下限
我们在Berthold只使用已知标准和以下公式来计算检测限:
ConcentrationS (浓度) | 标准*信号浓度(pg/mL) |
StdevB | 填充空白井的标准偏差 |
meanS | 标准*的平均井数 |
meanB | 平均井填满空白 |
*任何标准点的平均读数至少高于空白区平均读数100倍。
由于上面的公式,一个稳定的背景变得非常重要:我们取背景均值的3个标准差,这是> 99%的正态分布。灵敏的仪器会清楚地区分空白噪声和采样信号。看看下面的例子,看看高背景变化的影响:
仪器1 | 仪器2 | |
---|---|---|
meanB | 50 | 15 |
StdevB | 10 | 15 |
浓度(pg / mL) | 100 | 100 |
信号标准 | 100,000 | 100,000 |
信号/噪声 | 2,000 | 6,667 |
计算检出限 | 0.030 | 0.045 |
尽管仪器2的背景信号较低,但由于其背景标准偏差较高,因此灵敏度较低。 较低的检测限(灵敏度)可以帮助您节省时间和金钱,尤其是在检测接近检测限的信号时。 这可以帮助减少昂贵试剂或有价值细胞的消耗。 这也可以显着减少每个样品的读取时间并节省总的操作时间。 观察灵敏度时,仪器中使用的检测器的稳定性非常重要。 这就是为什么伯托公司选择所有的光电倍增管(PMT)并使用各种参数和各种温度对其进行测试,以确保将最佳的PMT装配在板式读数仪中的原因。
噪音低,背景稳定
蓝色/绿色/红色效率
长期稳定性
检测效率高