敏感的单位

大多数微孔板阅读器规范将其灵敏度表示为一种物质的数量,典型的是ATP或荧光素酶表示发光,荧光素表示荧光。对于其他检测技术,可以是使用该技术的试剂盒检测到的任何其他物质。他们还会使用Femtomole、Attomole和Zeptomole等术语。那么,这些术语是什么意思?

您们知道,阿伏伽德罗数是一摩尔物质中的分子数。其值为6.022 x 1023。因此,一摩尔物质由602,250,000,000,000,000,000,000个分子组成:

  • 一个飞模是1 × 10-15或千万亿分之一摩尔(0.000000000000001)。这是~602,200,000个分子(阿伏伽德罗数X (1 X 10-15))。

  • 一个原子是1 × 10-18,即1摩尔(0.000000000000000001)的十亿万亿分之一,大约有602,200个分子。

  • 一个Zeptomole是1 × 10-21,即1摩尔的10的10次方之一(0.00000000000000001),大约602个分子。

正如您从上面看到的,这意味着我们处理的数字非常小,特别是在Zeptomole水平。那么,我们如何利用所有这些来评估任何仪器的性能呢?我们需要考虑两个关键标准:检测下限(灵敏度)和变异系数。

  • 检测的下限是产生仪器响应超过空白噪声的最小采样量,称为灵敏度。

  • 变异系数是一组读数随时间变化的百分比——这意味着仪器性能的一致性。

变异系数和下限只能用已知的标准来获得。

计算检测下限

我们在Berthold只使用已知标准和以下公式来计算检测限:

Formula used to detect the detection limit of a microplate reader

ConcentrationS (浓度)

标准*信号浓度(pg/mL)

StdevB

填充空白井的标准偏差

meanS

标准*的平均井数

meanB

平均井填满空白

*任何标准点的平均读数至少高于空白区平均读数100倍。

由于上面的公式,一个稳定的背景变得非常重要:我们取背景均值的3个标准差,这是> 99%的正态分布。灵敏的仪器会清楚地区分空白噪声和采样信号。看看下面的例子,看看高背景变化的影响:

 

仪器1

仪器2

meanB  5015
StdevB 1015

浓度(pg / mL)

100100

信号标准

100,000100,000

 信号/噪声  

2,0006,667

计算检出限

0.0300.045

尽管仪器2的背景信号较低,但由于其背景标准偏差较高,因此灵敏度较低。 较低的检测限(灵敏度)可以帮助您节省时间和金钱,尤其是在检测接近检测限的信号时。 这可以帮助减少昂贵试剂或有价值细胞的消耗。 这也可以显着减少每个样品的读取时间并节省总的操作时间。 观察灵敏度时,仪器中使用的检测器的稳定性非常重要。 这就是为什么伯托公司选择所有的光电倍增管(PMT)并使用各种参数和各种温度对其进行测试,以确保将最佳的PMT装配在板式读数仪中的原因。

  • 噪音低,背景稳定

  • 蓝色/绿色/红色效率

  • 长期稳定性

  • 检测效率高

我们的微孔板阅读器只使用低噪声、稳定背景、高效率和在通常实验室温度下长期稳定的pts。这保证了成功研究所需的性能。这使得Centro XS微孔板光度计和Tristar 5多模读取器成为同类中最敏感的仪器。

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